干细胞是一类具有自我复制和分化潜能的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞。新近研究表明干细胞可以为临床细胞替代治疗和移植治疗提供新的细胞来源,有广阔应用前景。
干细胞是指那些具有自我更新能对于神经干细胞的研究颇多也颇深入,并且已经有实验表明神经干细胞的移植可以治愈帕金森病。
随着细胞替代治疗的发展,干细胞移植治疗已成为临床上治疗某些疾病的重要手段,利用干细胞在体外扩增培养并诱导成所需要的细胞后移植入患者体内,用于组织损伤的修复、退行性器官的替代及改善遗传性缺陷组织器官的功能。而成体干细胞可塑性分化的发现,为细胞替代治疗提供了新的种子细胞。
所谓细胞分离(cellisolation),指的是将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程。而所谓细胞纯化更进一步强调从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。通过细胞的分离和纯化过程,使培养物成为单一类型培养物,甚至是遗传特性完全一致的培养物,后者即细胞系。分离和纯化两个概念之间没有截然的界限,许多情况下,细胞分离和纯化并不是完全彻底的,培养物中只能达到以某种细胞为主的程度,所以也成称为富集(enrichment)。分离和纯化细胞的过程不仅仅在原代培养之前进行的,有时分离和纯化细胞的过程还贯穿于原代培养和继代培养的过程中,甚至是主要依赖培养过程实现分离和纯化细胞的目的。培养物中细胞成分是否单一或者目的细胞在培养物中的比例如何,常是衡量某一培养工作是否成功的重要指标。
从成分混杂的细胞悬液中将不同的细胞区分开来达到分离纯化,主要是依据不同的细胞具有各种不同的特性来实现的,也可利用细胞的物理特性如密度,体积,电荷等,以及细胞生物学特性如特异的表面标志和功能。一种细胞,其数量稀少又难以识别往往就更不容易被分离纯化。因词虽然已经对造血干细胞的特性了解得比较清楚,但人们仍在努力探索更简单,更快捷的干细胞分离方法,因为通过常规方法富集到的干细胞远不能满足干细胞生物学和调控研究对干细胞数量和纯度的要求。将基于干细胞的物理特性和生物学特性的分离纯化方法相结合,通常可以获得较好的效果,也只有通过合理的综合应用两种以上不同的分离纯化方法,才可能在细胞回收率,细胞纯度及细胞活力等方面达到比较满意的效果。尤其是干细胞在组织中比例极低,也使人们不得不采用多步骤的分离方法,通常每一步骤都采用一种不同的分离参数。例如,在抗体介导的分离技术之前常西安用密度梯度法对目的细胞进行富集。
最初的“预富集”步骤可以看作是减少体积的步骤,纸样可以减少随后分离步骤中世纪的用量。当采用多级分离步骤时,预先估计整个过程中的细胞损失是非常重要的,南宫28登录入口因为为了获得高纯度的细胞可能会影响到细胞的回收率。
为了分离目的细胞首先必须将目的细胞所在的动物组织材料制备成单细胞悬液。细胞分散一方面是细胞分离纯化的前提;另一方面,在分散细胞的过程中,通过一定的辅助性方法,也能对组织细胞起到一定的分离纯化作用。
机械分离以及酶学分离是组织分散成单细胞最常用的方法。在机械风力方法中,常用的技术包括用吸管或针头吹打,用组织研磨器或注射器研磨,用不锈钢或尼龙筛网搓洗等。其中按照组织内不同细胞的大小
