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1.本发明属于化妆品领域，具体涉及一种干细胞外泌体抗衰精华液制备方法。
2.干细胞外泌体，是一种能被大多数干细胞分泌的微小囊泡，直径大约在30
150nm，由脂质、蛋白质和核酸组成。外泌体一旦通过胞吐作用从干细胞中释放，复杂的混合因子能作为信号分子传递给其他细胞，从而改变其他细胞的功能，外泌体被包裹在坚硬的双层膜中，双层膜保护外泌体的内容物，使外泌体能够在组织中长距离移动。干细胞外泌体因在上皮组织的增殖、迁移、再生、炎症和瘢痕控制等方面的作用，成为“无细胞的细胞治疗”工具，而精华液则是用于脸部护肤品中的一种，含有较珍贵的功效成分。
3.可参考公开号为cn108670913a的中国专利，其公开具有乌发效果的植物精华液，涉及日用化工技术领域。本精华液可以采用中药提取物0.3％
1％的酒糟水解物按重量百分比原料组成。本发明添加的中药组分有当归、川芎、白芷、桑椹、西红花和侧柏叶，各中药组分按特定提取工艺分别提取并按特定比例混合。
4.上述专利具有明显乌发效果的优点，但是其也存在缺陷，如：其无法延缓衰老，改善肤质，且无法适用与所有皮肤。
5.本发明的目的在于提供一种干细胞外泌体抗衰精华液制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
9.s12.一次混合：将铁皮石斛提取液、灵芝发酵滤液、丝瓜提取液、植物多糖以及去离子水依次放入反应釜内，控制反应釜的转速在200
10.s13.二次混合：随后向s12中得到的混合溶液中依次加入干细胞外泌体悬液、复合维生素以及裂裥菌素，控制反应釜的温度在30
11.s14.消毒灌装：对s13中得到的精华液进行灭菌操作，灭菌完成后使用灌装设备进行灌装，控制每瓶的净含量在50
14.s21.选择新鲜、洁净的铁皮石斛烘干，然后将铁皮石斛干放入粉碎机内粉碎，得到
70℃，将s21得到的铁皮石斛粉末投入，控制反应釜的转速为600r/min，持续搅拌20
50min后得到混合液，然后对混合液进行过滤，除去残留铁皮石斛颗粒，然后向混合液中放入复合酶进行酶解，控制酶解时间在1
16.s23.对酶解后的混合液进行吸附与洗脱操作，得到半成品液，最后对半成品液进行浓缩，控制浓缩后半成品液的浓度在18
17.优选的，所述s23中使用分子筛对所述混合液进行吸附操作，使用乙醇水溶液对所述混合液进行洗脱操作。
19.s31、将精华液初液注入消毒灭菌后的玻璃容器内，然后将玻璃容器的使用封盖密封；
20.s32、启动紫外线杀菌器对玻璃容器外部以及封盖杀菌，然后将封盖打开后，将玻璃容器与精华液初液送入杀菌设备内部，再使用真空泵将杀菌设备内部的空气抽出，使杀菌设备内部处于线、启动杀菌设备对玻璃容器内部的精华液初液进行杀菌，同时利用杀菌设备内部的搅拌机构对精华液初液进行混合。
23.优选的，所述复合维生素由维生素a、维生素b6、维生素e以及维生素h组合而成，所述维生素a、所述维生素b6、所述维生素e以及所述维生素h之间的质量比为1：1：2：1.5。
24.优选的，所述植物多糖由金针菇多糖、银耳多糖、油柑多糖、人参多糖以及肉苁蓉多糖组合而成，所述金针菇多糖、所述银耳多糖、所述油柑多糖、所述人参多糖以及所述肉苁蓉多糖之间的质量比为2：3：2：1：2。
25.优选的，所述干细胞外泌体悬液为间充质干细胞分泌体悬液，所述干细胞外泌体悬液中含有改善肤质的质粒载体。
27.s41、使用含血清的培养基培养干细胞，培养完成进行提取，得到干细胞，然后将干细胞放置在培养基中，培养1
28.s42、然后过滤除去培养基中的干细胞进行过滤，将过滤后的干细胞溶液放入离心管中，离心处理后去除离心管内的上清液，得到干细胞悬重液，然后进行沉淀；
29.s43、将沉淀后的干细胞悬重液以50000个/cm2的细胞密度，接种于培养瓶内，然后对培养瓶进行培养；
30.s44、待培养完成后将所有培养瓶内的干细胞悬重液集中到离心容器内，反复离心3
5次，每次离心后去除上清液，最后得到的沉淀溶液即为本干细胞外泌体悬液。
32.本干细胞外泌体抗衰精华液制备方法在使用时，干细胞外泌体可以促进皮肤相关的成纤维细胞、角质化细胞再生，同时分泌胶原蛋白、弹性纤维蛋白和基质成分，达到修复皮肤的功能，促进皮肤细胞生长营养供给所需的血管生成，抑制过度炎症反应，抑制疤痕形
33.铁皮石斛提取液含有多糖，黄酮类和酚类等天然保湿、抗氧化活性成分，能够有效抵御外界对于皮肤的氧化作用，从而起到非常好的护肤效果，另外铁皮石斛性微寒，具有滋阴润燥、补血益气以及延缓衰老的功效；
34.丝瓜提取液含有多种糖类、植物的黏液、多种维生素以及微量矿物质，能够维持人体皮肤角质层正常的含水量，具有减缓脱水，补充肌肤必要水分，保持肌肤水嫩、细腻的优点；同时丝瓜提取液当中还含有大量的天然保湿因子，可以使肌肤富有弹性，保持滋润，还能促进新陈代谢，清除皮肤深层的污垢，抑制黑色素细胞的生成，能够改善粗糙的皮肤，消除皱纹；
35.综上本发明通过各原料之间的相辅相成，使美容、抗衰老效果叠加，可以适用于任何肤质，同时具有无任何副作用、有效改善肤质、延缓衰老、消除皱纹、修复损伤肤质以及抑制炎症与疤痕的优点。
37.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
41.s11.准备材料：准备以下重量计组分原料：干细胞外泌体悬液6份、铁皮石斛提取液6份、灵芝发酵滤液3份、复合维生素2份、裂裥菌素0.6份、丝瓜提取液2份、植物多糖2份以及去离子水55份：
42.s12.一次混合：将铁皮石斛提取液、灵芝发酵滤液、丝瓜提取液、植物多糖以及去离子水依次放入反应釜内，控制反应釜的转速在300r/min，温度控制在60℃，持续混合30min后得到混合溶液；
43.s13.二次混合：随后向s12中得到的混合溶液中依次加入干细胞外泌体悬液、复合维生素以及裂裥菌素，控制反应釜的温度在37℃，持续混合2h后取出，即得本精华液；
44.s14.消毒灌装：对s13中得到的精华液进行灭菌操作，灭菌完成后使用灌装设备进行灌装，控制每瓶的净含量在50ml。
45.本实施例中，优选的，干细胞外泌体悬液中每毫升溶液含有35mg蛋白质。
47.s21.选择新鲜、洁净的铁皮石斛烘干，然后将铁皮石斛干放入粉碎机内粉碎，得到铁皮石斛粉末；
48.s22.向反应釜内加入去离子水，然后加热到60℃，将s21得到的铁皮石斛粉末投
入，控制反应釜的转速为600r/min，持续搅拌35min后得到混合液，然后对混合液进行过滤，除去残留铁皮石斛颗粒，然后向混合液中放入复合酶进行酶解，控制酶解时间在3h；
49.s23.对酶解后的混合液进行吸附与洗脱操作，得到半成品液，最后对半成品液进行浓缩，控制浓缩后半成品液的浓度在25brix，即得到本铁皮石斛提取液。
50.本实施例中，优选的，s23中使用分子筛对混合液进行吸附操作，使用乙醇水溶液对混合液进行洗脱操作。
52.s31、将精华液初液注入消毒灭菌后的玻璃容器内，然后将玻璃容器的使用封盖密封；
53.s32、启动紫外线杀菌器对玻璃容器外部以及封盖杀菌，然后将封盖打开后，将玻璃容器与精华液初液送入杀菌设备内部，再使用真空泵将杀菌设备内部的空气抽出，使杀菌设备内部处于线、启动杀菌设备对玻璃容器内部的精华液初液进行杀菌，同时利用杀菌设备内部的搅拌机构对精华液初液进行混合。
55.本实施例中，优选的，s33中控制搅拌机构的搅拌速率在60r/min，然后控制杀菌设备的杀菌时间为4h。
56.本实施例中，优选的，复合维生素由维生素a、维生素b6、维生素e以及维生素h组合而成，维生素a、维生素b6、维生素e以及维生素h之间的质量比为1：1：2：1.5。
57.本实施例中，优选的，植物多糖由金针菇多糖、银耳多糖、油柑多糖、人参多糖以及肉苁蓉多糖组合而成，南宫28官方网站金针菇多糖、银耳多糖、油柑多糖、人参多糖以及肉苁蓉多糖之间的质量比为2：3：2：1：2。
58.本实施例中，优选的，干细胞外泌体悬液为间充质干细胞分泌体悬液，干细胞外泌体悬液中含有改善肤质的质粒载体。
60.s41、使用含血清的培养基培养干细胞，培养完成进行提取，得到干细胞，然后将干细胞放置在培养基中，培养2天；
61.s42、然后过滤除去培养基中的干细胞进行过滤，将过滤后的干细胞溶液放入离心管中，离心处理后去除离心管内的上清液，得到干细胞悬重液，然后进行沉淀；
62.s43、将沉淀后的干细胞悬重液以50000个/cm2的细胞密度，接种于培养瓶内，然后对培养瓶进行培养；
63.s44、待培养完成后将所有培养瓶内的干细胞悬重液集中到离心容器内，反复离心4次，每次离心后去除上清液，最后得到的沉淀溶液即为本干细胞外泌体悬液。
65.本干细胞外泌体抗衰精华液制备方法在使用时，干细胞外泌体可以促进皮肤相关的成纤维细胞、角质化细胞再生，同时分泌胶原蛋白、弹性纤维蛋白和基质成分，达到修复皮肤的功能，促进皮肤细胞生长营养供给所需的血管生成，抑制过度炎症反应，抑制疤痕形成；
66.铁皮石斛提取液含有多糖，黄酮类和酚类等天然保湿、抗氧化活性成分，能够有效抵御外界对于皮肤的氧化作用，从而起到非常好的护肤效果，另外铁皮石斛性微寒，具有滋
67.丝瓜提取液含有多种糖类、植物的黏液、多种维生素以及微量矿物质，能够维持人体皮肤角质层正常的含水量，具有减缓脱水，补充肌肤必要水分，保持肌肤水嫩、细腻的优点；同时丝瓜提取液当中还含有大量的天然保湿因子，可以使肌肤富有弹性，保持滋润，还能促进新陈代谢，清除皮肤深层的污垢，抑制黑色素细胞的生成，能够改善粗糙的皮肤，消除皱纹；
68.综上本发明通过各原料之间的相辅相成，使美容、抗衰老效果叠加，可以适用于任何肤质，同时具有无任何副作用、有效改善肤质、延缓衰老、消除皱纹、修复损伤肤质以及抑制炎症与疤痕的优点。
71.s11.准备材料：准备以下重量计组分原料：干细胞外泌体悬液2份、铁皮石斛提取液5份、灵芝发酵滤液2份、复合维生素1份、裂裥菌素0.5份、丝瓜提取液1份、植物多糖1份以及去离子水60份：
72.s12.一次混合：将铁皮石斛提取液、灵芝发酵滤液、丝瓜提取液、植物多糖以及去离子水依次放入反应釜内，控制反应釜的转速在200r/min，温度控制在40℃，持续混合20min后得到混合溶液；
73.s13.二次混合：随后向s12中得到的混合溶液中依次加入干细胞外泌体悬液、复合维生素以及裂裥菌素，控制反应釜的温度在30
74.s14.消毒灌装：对s13中得到的精华液进行灭菌操作，灭菌完成后使用灌装设备进行灌装，控制每瓶的净含量在50ml。
75.本实施例中，优选的，干细胞外泌体悬液中每毫升溶液含有20mg蛋白质。
77.s21.选择新鲜、洁净的铁皮石斛烘干，然后将铁皮石斛干放入粉碎机内粉碎，得到铁皮石斛粉末；
78.s22.向反应釜内加入去离子水，然后加热到50℃，将s21得到的铁皮石斛粉末投入，控制反应釜的转速为600r/min，持续搅拌20min后得到混合液，然后对混合液进行过滤，除去残留铁皮石斛颗粒，然后向混合液中放入复合酶进行酶解，控制酶解时间在1h；
79.s23.对酶解后的混合液进行吸附与洗脱操作，得到半成品液，最后对半成品液进行浓缩，控制浓缩后半成品液的浓度在18brix，即得到本铁皮石斛提取液。
80.本实施例中，优选的，s23中使用分子筛对混合液进行吸附操作，使用乙醇水溶液对混合液进行洗脱操作。
82.s31、将精华液初液注入消毒灭菌后的玻璃容器内，然后将玻璃容器的使用封盖密封；
83.s32、南宫28官方网站启动紫外线杀菌器对玻璃容器外部以及封盖杀菌，然后将封盖打开后，将玻璃容器与精华液初液送入杀菌设备内部，再使用真空泵将杀菌设备内部的空气抽出，使杀菌设备内部处于线、启动杀菌设备对玻璃容器内部的精华液初液进行杀菌，同时利用杀菌设备内
85.本实施例中，优选的，s33中控制搅拌机构的搅拌速率在50r/min，然后控制杀菌设备的杀菌时间为3h。
86.本实施例中，优选的，复合维生素由维生素a、维生素b6、维生素e以及维生素h组合而成，维生素a、维生素b6、维生素e以及维生素h之间的质量比为1：1：2：1.5。
87.本实施例中，优选的，植物多糖由金针菇多糖、银耳多糖、油柑多糖、人参多糖以及肉苁蓉多糖组合而成，金针菇多糖、银耳多糖、油柑多糖、人参多糖以及肉苁蓉多糖之间的质量比为2：3：2：1：2。
88.本实施例中，优选的，干细胞外泌体悬液为间充质干细胞分泌体悬液，干细胞外泌体悬液中含有改善肤质的质粒载体。
90.s41、使用含血清的培养基培养干细胞，培养完成进行提取，得到干细胞，然后将干细胞放置在培养基中，培养1天；
91.s42、然后过滤除去培养基中的干细胞进行过滤，将过滤后的干细胞溶液放入离心管中，离心处理后去除离心管内的上清液，得到干细胞悬重液，然后进行沉淀；
92.s43、将沉淀后的干细胞悬重液以50000个/cm2的细胞密度，接种于培养瓶内，然后对培养瓶进行培养；
93.s44、待培养完成后将所有培养瓶内的干细胞悬重液集中到离心容器内，反复离心3次，每次离心后去除上清液，最后得到的沉淀溶液即为本干细胞外泌体悬液。
96.s11.准备材料：准备以下重量计组分原料：干细胞外泌体悬液10份、铁皮石斛提取液10份、灵芝发酵滤液5份、复合维生素3份、裂裥菌素0.8份、丝瓜提取液3份、植物多糖3份以及去离子水60份：
97.s12.一次混合：将铁皮石斛提取液、灵芝发酵滤液、丝瓜提取液、植物多糖以及去离子水依次放入反应釜内，控制反应釜的转速在500r/min，温度控制在65℃，持续混合40min后得到混合溶液；
98.s13.二次混合：随后向s12中得到的混合溶液中依次加入干细胞外泌体悬液、复合维生素以及裂裥菌素，控制反应釜的温度在40℃，持续混合4h后取出，即得本精华液；
99.s14.消毒灌装：对s13中得到的精华液进行灭菌操作，灭菌完成后使用灌装设备进行灌装，控制每瓶的净含量在100ml。
100.本实施例中，优选的，干细胞外泌体悬液中每毫升溶液含有35mg蛋白质。
102.s21.选择新鲜、洁净的铁皮石斛烘干，然后将铁皮石斛干放入粉碎机内粉碎，得到铁皮石斛粉末；
103.s22.向反应釜内加入去离子水，然后加热到70℃，将s21得到的铁皮石斛粉末投入，控制反应釜的转速为600r/min，持续搅拌50min后得到混合液，然后对混合液进行过滤，除去残留铁皮石斛颗粒，然后向混合液中放入复合酶进行酶解，控制酶解时间在5h；
104.s23.对酶解后的混合液进行吸附与洗脱操作，得到半成品液，最后对半成品液进
行浓缩，控制浓缩后半成品液的浓度在35brix，即得到本铁皮石斛提取液。
105.本实施例中，优选的，s23中使用分子筛对混合液进行吸附操作，使用乙醇水溶液对混合液进行洗脱操作。
107.s31、将精华液初液注入消毒灭菌后的玻璃容器内，然后将玻璃容器的使用封盖密封；
108.s32、启动紫外线杀菌器对玻璃容器外部以及封盖杀菌，然后将封盖打开后，将玻璃容器与精华液初液送入杀菌设备内部，再使用真空泵将杀菌设备内部的空气抽出，使杀菌设备内部处于线、启动杀菌设备对玻璃容器内部的精华液初液进行杀菌，同时利用杀菌设备内部的搅拌机构对精华液初液进行混合。
110.本实施例中，优选的，s33中控制搅拌机构的搅拌速率在80r/min，然后控制杀菌设备的杀菌时间为5h。
111.本实施例中，优选的，复合维生素由维生素a、维生素b6、维生素e以及维生素h组合而成，维生素a、维生素b6、维生素e以及维生素h之间的质量比为1：1：2：1.5。
112.本实施例中，优选的，植物多糖由金针菇多糖、银耳多糖、油柑多糖、人参多糖以及肉苁蓉多糖组合而成，金针菇多糖、银耳多糖、油柑多糖、人参多糖以及肉苁蓉多糖之间的质量比为2：3：2：1：2。
113.本实施例中，优选的，干细胞外泌体悬液为间充质干细胞分泌体悬液，干细胞外泌体悬液中含有改善肤质的质粒载体。
115.s41、使用含血清的培养基培养干细胞，培养完成进行提取，得到干细胞，然后将干细胞放置在培养基中，培养3天；
116.s42、然后过滤除去培养基中的干细胞进行过滤，将过滤后的干细胞溶液放入离心管中，离心处理后去除离心管内的上清液，得到干细胞悬重液，然后进行沉淀；
117.s43、将沉淀后的干细胞悬重液以50000个/cm2的细胞密度，接种于培养瓶内，然后对培养瓶进行培养；
118.s44、待培养完成后将所有培养瓶内的干细胞悬重液集中到离心容器内，反复离心5次，每次离心后去除上清液，最后得到的沉淀溶液即为本干细胞外泌体悬液。
3制备的精华液与市场常规的精华液，然后将各精华液等量分成50份，然后随机邀请200名年龄在40
60岁的试用者，再以50名试用者为一组分别分发实施例1、实施例2、实施例3制备的精华液以及常规精华液，并分别建立一个微信群实时记录试用者的使用反馈，对实施例1、实施例2、实施例3以及常规精华液试用者的群聊分别命名为1组、2组、3组以及常规组；
121.试用周期为六个月，平均每人每日使用两次所发精华液，使用方法为净面后将精华液均匀涂抹于肌肤，最后统计的试用数据如下：
122.1组：50名试用者中途退出2名，满意率为99.5％；试用者表示长期使用对皮肤无刺激性，使用后明显感到舒适、无油腻感，具有较好的抗皱防衰老、改善肤质以及美白护肤效
123.2组：50名试用者中途退出5名，满意率为97.7％；试用者表示长期使用对皮肤无刺激性，使用后明显感到舒适、无油腻感，具有较好的抗皱防衰老、改善肤质以及美白护肤效果；
124.3组：50名试用者中途退出3名，满意率为98.6％；试用者表示长期使用对皮肤无刺激性，使用后明显感到舒适、无油腻感，具有较好的抗皱防衰老、改善肤质以及美白护肤效果；
125.常规组：50名试用者中途退出18名，满意率仅为68.3％；试用一个月后有15名试用者出现皮肤过敏、瘙痒等症状，试用6个月后肌肤肤质并无明显改善。
126.综上得出实施例1、实施例2以及实施例3制备的精华液无任何副作用，不会产生依赖，且抗衰老效果明显，同时还具有改善肤质的效果；常规精华液不适用于所有肌肤，有部分人群使用会产生过敏等症状，抗衰老效果较差。
127.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
1.制浆造纸 2.植物资源精细化工与化学 3.生物质精炼 4.天然产物化学
1.CRISPR-Cas系统 2.基因编辑 3.基因修复 4.天然产物合成 5.单分子技术开发与应用
1. 基于糖类的抗肿瘤药物的合成和活性评价及糖类疫苗的研制 2.功能糖类的化学酶法合成及构效关系研究 3.多糖及仿生材料功能的开发及应用
1.天然产品的提取分离与活性研究 2.天然产物活性与安全性评价 3.中药组方配伍机制研究